Институт Косметологии НГМУ
 


РиП
© 2006 - 2014
Архив

г. Новосибирск,

Главный корпус НГМУ,
3 этаж, правое крыло

Тел/факс: +7(383)
Мы работаем с 9-00 до 18-00

Центр медицинской косметологии (Институт косметологии) ГБОУ ВПО НГМУ Минздравсоцразвития России

Раздел:Архив / Тезисы за июнь 2007 г.

Опыт применения культивированных аллофибробластов при лечении ран различной этиологии

В последние годы показана возможность использования как ауто-, так и аллофибробластов кожи человека для лечения ожоговых ран. Перспективность исследований с использованием аллофибробластов обусловлена высоким потенциалом жизнеспособности эмбриональных клеток и способностью восстанавливать кожный покров без образования выраженных рубцовых изменений. Показано, что эти клетки способны синтезировать коллаген и факторы роста, необходимые для заживления ран. Возможность культивирования эмбриональных клеток человека, сохраняющих стабильные свойства в течение десятков пассажей in vitro делают их весьма перспективными для новых медицинских технологий.
В рамках Федеральных программ научных и научно-практических исследований 1999-2002 годов в ГНЦ ВБ «Вектор» были получены и аттестованы в соответствии с современными требованиями банки диплоидных фибробластов человека, пригодные для проведения научных и клинических исследований. В экспериментах на животных показано отсутствие посторонних вирусов и онкогенных потенций.
Целью настоящего исследования явилось изучение возможности применения аттестованных диплоидных клеток (фибробластов) человека для лечения ожоговых и других длительно незаживающих ран.
Исследования проводились в соответствии с современными требованиями Этического комитета. Программа ограниченных научных исследований была утверждена на Заседании …..
Отбор пациентов. Исследования проводились на ограниченном количестве больных. Трансплантация клеток осуществлялась строго по решению консилиума врачей. В исследовании принимали участие больные с глубокими и обширными поражениями от 40% и более, где применение фибробласты было необходимо по жизненным показаниям. Кроме того, в исследования были включены больные с отморожениями конечностей и, как следствие, с хроническими незаживающими слабо гранулирующими ранами. Исследования проводились строго с соблюдением этических норм. Пациенты были информированы о предстоящей трансплантации в полном объеме, получено добровольное согласие, подписаны информированные согласия.
Исследования. Проводились клинические, биохимические, цитологические, иммунологические, гистологические исследования. Исследовались скорость эпителизации раны, изменения клеточного и иммунологического состава раневой поверхности в динамике лечения.
В исследовании использовали аллофибробласты, имеющие полную паспортную характеристику. В связи с этим был сделан выбор в пользу диплоидных штаммов фибробластов Л-68 , ФЭЧ 16-1 и ФЭЧ 16-2 , охарактеризованных, согласно требований ВСКК, и сохраняемых в низкотемпературном банке — музее НИИ КК ГНЦ ВБ «Вектор».
В процессе подготовки пленка (субстрат) обрабатывалась 96% спиртом, замачивалась на 2 часа в растворе детергента, затем промывалась проточной водой в течении 3 минут и дистиллированной водой не менее 10 раз. Затем пленка стерилизовалась автоклавированием в дистиллированной воде при 1,5 атмосферах в течении 30 минут. Вместе с пленкой автоклавировался желатин. Горячий желатин капали на чашку Петри (для фиксации пленки). Клетки высевали на пленку, культивировали в течение 72 часов до образования монослоя клеток.
Для исследования были использованы:
Штамм диплоидных клеток легкого эмбриона человека Л-68, полученный в Московском НИИ вирусных препаратов Л. Г. Степановой и др. из клеток легкого эмбриона человека 11 недель, абортированного у женщины 28 лет; онкологические, венерические заболевания, гепатит, туберкулез, генетические и врожденные аномалии отсутствуют. Посевной банк штамма диплоидных клеток Л-68 на 9-ом пассаже был аттестован для приготовления иммунобиологических препаратов в в Московском НИИ вирусных препаратов совместно с ГИСК им. Л. А. Тарасевича . В лабораторию банка культур клеток ГНЦ ВБ «Вектор» из Московском НИИ вирусных препаратов штамм диплоидных культур клеток легкого эмбриона человека Л-68 на 12 пассаже поступил 15.10.84 г. в количестве 200 ампул, замороженных 04.11.83г. и хранившихся в жидком азоте. В ГНЦ ВБ Вектор был создан посевной банк диплоидных клеток Л-68 от 15.10.84г. (12 пассаж) и рабочие банки диплоидных клеток Л-68 (17 пассаж) № 1722 от 06.07.90, № 1907 от 28.12.95. Банки аттестованы в ГНЦ ВБ Вектор и в ГИСК им Л.А.Тарасевича (выписка из протокола №11 от 18.07.96 и заседания ученого совета ГИСК им. Л.А.Тарасевича).
Штамм диплоидных клеток легкого эмбриона человека ФЭЧ 16-1 полученный в НИИ КК ГНЦ ВБ «Вектор» из ткани легкого эмбриона человека 11 недель, абортированного у женщины 18 лет. Онкологические, венерические заболевания, гепатит, туберкулез, генетические и врожденные аномалии в анамнезе донора отсутствуют. Суспензия клеток заморожена в количестве 204 ампулы на 11–ом пассаже, заморозка № 1952 от 02. 02.98 (основной банк). Суспензия клеток заморожена в количестве 252 ампулы на 15–ом пассаже. Заморозка № 1957 от 20. 04.98 (рабочий банк). Передано на аттестацию в ГИСК им. Л. А. Тарасевича.27.05.2002. Банки аттестованы в ГНЦ ВБ Вектор и в ГИСК им Л.А.Тарасевича (Экспертное заключение по результатам аттестации диплоидных культур клеток человека для заместительной терапии от 21.06.2003г., утвержденное Ученым советом ГИСК им. Л.А.Тарасевича; выписка из протокола Комитета МИБП №6 от 26.06.2003).
Штамм диплоидных клеток кожно-мышечной ткани эмбриона человека ФЭЧ 16-2 получен в НИИ КК ГНЦ ВБ «Вектор» из кожно-мышечной ткани эмбриона человека 11 недель, абортированного у женщины 18 лет. Онкологические, венерические заболевания, гепатит, туберкулез, генетические и врожденные аномалии в анамнезе донора отсутствуют. Суспензия клеток заморожена в количестве 312 ампул на 11–ом пассаже, заморозка № 1948 от 13.11.97 (основной банк). Суспензия клеток заморожена в количестве 252 ампулы на 15–ом пассаже. Заморозка № 1953. от 19.03.98 (рабочий банк). Передано на аттестацию в ГИСК им. Л. А. Тарасевича.27.05.2002. Банки аттестованы в ГНЦ ВБ Вектор и в ГИСК им Л.А.Тарасевича (Экспертное заключение по результатам аттестации диплоидных культур клеток человека для заместительной терапии от 21.06.2003г., утвержденное Ученым советом ГИСК им. Л.А.Тарасевича; выписка из протокола Комитета МИБП № 6 от 26.06.2003).
Подготовка клеток и трансплантация. Культуры клеток фибробластов человека использовали в виде монослоя на субстрате или в виде суспензии в геле. Клетки выращивали в соответствии с регламентом в питательной среде с добавлением 5-10% сыворотки крови эмбрионов коров.
Клетки транспортировали с соблюдением асептических условий и соблюдением температурного режима.
Трансплантация клеток на рану осуществлялась в условиях операционной на ожоговые раны в нескольких вариантах:
У пострадавших с обширными и глубокими ожогами. После выведения из шока на 3-5 день поступления в стационар выполнялась ранняя хирургическая некрэктомия (дерматомом удалялся сухой струп до здоровой кожи) и на рану трансплантировали фибробласты для улучшения трофических свойств раны. Через двое суток после трансплантации клеток выполнялась аутодермопластика и рану закрывали перфорированным 1:4 расщепленным лоскутом.
Во втором варианте трансплантацию фибробластов применяли у пострадавших с обширными ожогами при гранулирующих, но слабо эпителизирующихся ранах, для стимуляции эпителизации за счет собственных клеток кожи.
Третий вариант трансплантации использовали у больных с длительно незаживающими ранами различного генеза: трофические на фоне сахарного диабета; вырикозного расширения вен, после ожога, отморожения). На рану наносили культуру диплоидных аллофибробластов и получили усиление репаративных verte процессов. Раны у данных больных лечились годами (от 1 до 5 лет).
РИС.1 Трансплантация клеток в условиях операционной.

¹Н.Г. Колосов¹, А.В.Ефремов², Т.Д. Колокольцова², Е.А. Евланова², Н.В. Шалунова³

¹Новосибирская государственная медицинская акдемия, Новосибирск, Россия
²Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор», Кольцово Новосибирской области, Россия
³Государственный контрольный институт им. Л.А. Тарсевича, Москва, Россия



 

 

"